关于RNA样品制备的流程及注意事项
芯片样品制备
一、RNA样品
?制备流程
1.总RNA或smallRNA溶于RNase-freeH2O（建议）或%酒精，保存于-80°C，直至送样。
2.以冰袋加上足量干冰低温寄送。
请确认使用的1.5mL离心管(EP管)管盖密合度佳，并以parafilm封口膜缠绕包装盖口。
3.以小盒、封口袋或50mL离心管包装样品，置于塑料袋中。送样单纸本请以封口袋或塑料带保护以免湿气毁损文件。将样品与文件置入盒内，以密闭性较佳或厚度较厚的泡沫盒，加入干冰搭配冰袋运送(一天所需的干冰量约3公斤)。以宽胶带缠绕密封泡沫盒即可寄出。
?送样量
1.建议使用Trizol纯化TotalRNA(包含smallRNA)，若使用市售column萃取试剂，请特别注意试剂的适用范围，进行microRNA芯片实验服务，需保留小核酸片段。
2.请您以分光光度计检测总量与浓度，送样前参照上表取出足量的样品，并建议您进行1.5%琼脂糖胶(洋菜胶)电泳分析，初步观察RNA无严重降解与DNA无污染后再行寄送。
3.要进行mRNA芯片检测服务的石蜡样品，RNA完整度要求AgilentBioanalyzer可以检测到28S的条带为准。
二、RNA萃取服务－细胞样品实验室接收加入Trizollysis试剂裂解保存的细胞样品。
?样品量与制备流程
?贴壁细胞：准备个细胞，去除培养液后不需PBS冲洗，直接加入Trizolreagent(Invitrogen#-，10cmpetridish约加入1mLTrizolreagent)，以枪头抽吸数次，将细胞溶解后保存于-80°C。(或者将细胞以Trypsin处理后，离心去除上清液再加入1mlTrizol，并震荡将细胞溶解后保存于-80°C。)
?悬浮细胞：约5~10×个细胞经离心收集后，去除上清液，加入1mLTrizolreagent，震荡将细胞溶解后保存于-80°C。
?寄送注意事项
1.自-80°C取出已加入Trizol均质裂解之细胞样品，确认各离心管/EP管或冷冻管盖密合度佳，且以parafilm封口膜缠绕包装盖口。
2.以小盒、封口袋或50mL离心管包装样品，置于塑料袋中。送样单纸本请以封口袋或塑料带保护以免湿气毁损文件。将样品与文件置入盒内，以密闭性较佳或厚度较厚的泡沫盒，加入干冰搭配冰袋运送(一天所需的干冰量约3公斤)。以宽胶带缠绕密封泡沫盒即可寄出。
?Trizol裂解样本的运送以能保证样品维持在4°C以下为原则。
三、RNA萃取服务－组织样品实验室接收保存在RNAlater的检体(剪碎)，TrizolReagent均质或活体取下后直接以液氮快速冻存的检体。
?样品量与制备流程
组织离开活体后请于30min内进行操作，准备20mg-mg的组织即可，组织块过大易拉长操作与保存液渗透时间，可能导致组织块中的RNA降解(degradation)：
1.液态氮保存法：准备20-mg的组织块，大小约0.5cmx0.5cmx0.5cm，先置于液态氮中快速冷冻，再将样品放入专门存放液态氮的冷冻小管中(请使用抗冻冷冻小管)，保存于液态氮筒中等待均质。
2.Trizolreagent(Invitrogen#-)保存法：准备20-mg的组织块，大小约0.5cmx0.5cmx0.5cm，置于1mLTrizolreagent保存于-80°C中等待均质。
3.RNAlater保存法：请参照RNAlater说明书进行操作。
注意使用RNAlater时，加入组织大小5-10倍体积的RNAlater溶液，以RNasefree的剪刀将组织剪成小块使RNAlater溶液能够完全浸透，先置于4°C冰箱过夜或至少3h，再转-20°C或-80°C保存，请勿直接置冰箱冻存。
?寄送注意事项
1.自液氮或-80°C(Trizol或RNAlater保存)取出样品，确认各离心管/EP管或冷冻管盖密合度佳，且以parafilm封口膜缠绕包装盖口。
2.以小盒、封口袋或50mL离心管包装样品，置于塑料袋中。送样单纸本请以封口袋或塑料带保护以免湿气毁损文件。将样品与文件置入盒内，以密闭性较佳或厚度较厚的泡沫盒，加入干冰搭配冰袋运送(一天所需的干冰量约3公斤)。以宽胶带缠绕密封泡沫盒寄出。
?RNAlater裂解样本的运送以能保证样品维持在4°C以下为原则。液氮或Trizol保存的样本需要全程以干冰运送。
四、RNA萃取服务－血清/血浆样品实验室仅接受无污染/感染性疑虑的血液样品。
?样品量与制备流程
1.血清/血浆：EDTA采血管(紫头)采2-3mL血液后，倒转混和均匀后，须将全血以离心进行血清/血浆与红血球分离(建议1-g，离心10min)，分离后的血清/血浆可存放于-20°C/-80°C数周至数月。
2.样品有特殊需求，请联络
?寄送注意事项
1.自-20°C/-80°C取出分离后的血清/血浆样品，确认离心管/EP管或冷冻管盖密合度佳，且以parafilm封口膜缠绕包装盖口。
2.以小盒、封口袋或50mL离心管包装样品，置于塑料袋中。送样单纸本请以封口袋或塑料带保护以免湿气毁损文件。将样品与文件置入盒内，以密闭性较佳或厚度较厚的泡沫盒，加入干冰搭配冰袋运送(一天所需的干冰量约3公斤)。以宽胶带缠绕密封泡沫盒寄出。
?血清/血浆样本的运送以能保证样品维持在4°C以下为原则。
?全血样本白细胞分离或白细胞RNA抽提请参考文件—全血样本制备
五、DNA萃取服务－血液样品实验室仅接受无污染/感染性疑虑的血液样品。
?样品量与制备流程
1.全血：EDTA采血管(紫头)采1mL以上的血液后，倒转混和均匀，可暂存放于4℃，一周内寄至公司。
2.样品有特殊需求，请联络。
?寄送注意事项
1.自4°C取出血液样品，血液检体贴上患者姓名及病历号，以冰袋寄送(勿以干冰运送)。
2.请确认离心管/EP管或冷冻管盖密合度佳，且以parafilm封口膜缠绕包装盖口
3.冰袋寄送方式：以小盒、封口袋或50mL离心管包装样品，置于塑料袋中。送样单纸本请以封口袋或塑料带保护以免湿气毁损文件。将样品与文件置入盒内，以密闭性较佳或厚度较厚的泡沫盒，加入冰袋运送(请勿加入干冰运送)。以宽胶带缠绕密封泡沫盒即可寄出。
4.请将检体与送检单、病患同意书及其他相关档置入盒内一起寄出。
5.为避免检体在运送途中留滞过久(周六日无人收件)，请事先联系收件单位，并避免于周末寄到。
qPCR样品制备
一、RNA样品
?样品量与制备流程
1.总RNA量浓度≥ng/ul，体积≥30μl。溶于RNase-freeH2O(建议)或%酒精，保存于-80°C，直至寄送。
2.如提供RNA样品，RNA变性胶电泳图谱。28SrRNA、18SrRNA在紫外灯下清晰可见，同时可见一条由tRNA、5.8SrRNA、5SrRNA的较模糊迁移较快的条带。28SrRNA：18SrRNA=2:1条带清晰无弥散现象，点样孔附近无条带（无DNA残留）。
?寄送注意事项
1.请确认使用的1.5mL微量离心管(EP管)管盖密合度佳，且以parafilm封口膜缠绕包装盖口。
2.加入足量干冰搭配冰袋运送(一天所需的干冰量约3公斤)。以宽胶带缠绕密封泡沫盒寄送。
二、血浆/血清样品：
?样品量与制备流程
1.血清/血浆：EDTA采血管(紫头)采2-3mL血液后，倒转混和均匀后，须将全血以离心进行血清/血浆与红血球分离(建议1-g，离心10min)，分离后的血清/血浆可存放于-20°C/-80°C数周至数月。血浆/血清样品体积≥μl。
?寄送注意事项
1.-20°C/-80°C取出分离后的血清/血浆样品，确认离心管/EP管或冷冻管盖密合度佳，且以parafilm封口膜缠绕包装盖口。
2.以小盒、封口袋或50mL离心管包装样品，置于塑料袋中。送样单纸本请以封口袋或塑料带保护以免湿气毁损文件。将样品与文件置入盒内，以密闭性较佳或厚度较厚的泡沫盒，加入干冰搭配冰袋运送(一天所需的干冰量约3公斤)。以宽胶带缠绕密封泡沫盒寄出。
三、组织、细胞样品：
?样品量与制备流程
1.细胞：准备5×个细胞，加入Trizolreagent(Invitrogen#-,10cmpetridish约加入1mLTrizolreagent)，以枪头抽吸数次，将细胞溶解后保存于-80°C。
2.组织：准备新鲜组织≥mg，液氮或-80℃保存（提供的样本所抽提出来的总RNA的量需大于10μg。）。
?寄送注意事项
1.-20°C/-80°C取出分离后的血清/血浆样品，确认离心管/EP管或冷冻管盖密合度佳，且以parafilm封口膜缠绕包装盖口。
2.以小盒、封口袋或50mL离心管包装样品，置于塑料袋中。送样单纸本请以封口袋或塑料带保护以免湿气毁损文件。将样品与文件置入盒内，以密闭性较佳或厚度较厚的泡沫盒，加入干冰搭配冰袋运送(一天所需的干冰量约3公斤)。以宽胶带缠绕密封泡沫盒寄出。
?Trizol裂解样本的运送以能保证样品维持在4℃以下为原则。
资料来源北京华大基因
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